目的探讨血清生化指标、骨髓细胞形态学、血涂片对巨幼细胞性贫血（MA）严重程度的诊断价值。方法选取2021年1月至2024年1月该院收治的100例MA患者作为研究组，同时选取健康体检者40例作为对照组。同时将研究组按血红蛋白（Hb）水平进一步分为轻度贫血组（42例）、中度贫血组（25例）、重度贫血组（23例）、极重度贫血组（10例）。比较各组血清维生素B12（VB12）、同型半胱氨酸（Hcy）、乳酸脱氢酶（LDH）、Hb、红细胞平均体积（MCV）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）水平，以及不同程度贫血组血涂片、骨髓细胞形态学结果，并分析各指标与贫血程度的相关性及对MA的鉴别价值。结果研究组血清VB12、Hb、WBC、PLT水平低于对照组，MCV、Hcy、LDH水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。随着贫血程度的加重，血清VB12水平越低，Hcy、LDH水平越高，差异有统计学意义（P＜0.05）。不同程度贫血组MCV、WBC、PLT水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。随着贫血程度的加重，幼红细胞、巨红细胞、异形红细胞、多分叶核中性粒细胞数量随之增加（P＜0.05）；骨髓粒系发育异常指标中幼粒巨幼变、异常细胞大于10%的占比越高（P＜0.05）；巨核系发育异常指标中多圆核单圆核巨核细胞占比越高（P＜0.05）；髓红系发育异常指标中多核红细胞、核间桥红细胞、发育异常细胞大于10%的占比越高（P＜0.05），且巨幼变幼红细胞及核型不规则红细胞占比均为100%。VB12水平与贫血程度呈负相关（P＜0.05）；幼红细胞、巨红细胞、异形红细胞、多分叶核中性粒细胞、幼粒巨幼变、异常细胞大于10%、多圆核单圆核巨核细胞、多核红细胞、核间桥红细胞占比及Hcy、LDH水平分别与贫血程度呈正相关（P＜0.05）。VB12、Hcy、LDH、血涂片、骨髓细胞形态学联合诊断重度、极重度MA的灵敏度、特异度、曲线下面积（AUC）、约登指数较单一指标高（P＜0.05）。结论血清VB12、Hcy、LDH、血涂片、骨髓细胞形态学分别与MA患者贫血程度有较高相关性，可为贫血程度的鉴别诊断提供依据。