目的分析MPT64抗原鉴定非结核分枝杆菌（NTM）的可行性，以便在基层医院推广应用。方法收集2020年1-12月该院MGIT960全自动分枝杆菌快速培养系统在1 177例疑似结核患者中培养分离的菌株，以靶向测序方法进行菌种鉴定作为“金标准”。分析荧光定量聚合酶链反应法与MPT64抗原鉴定NTM的能力。结果1 177例患者中分离得到分枝杆菌阳性菌株316例，培养阳性率达26.85%。运用靶向测序方法鉴定出结核分枝杆菌（MTB）284例，NTM 32例，NTM检出率为10.13%（32/316）。荧光定量聚合酶链反应检测MTB与NTM的灵敏度、特异度均为100.00%。MPT64抗原对MTB检测的灵敏度为98.59%，特异度为100.00%，准确性为98.70%。结论MPT64抗原对NTM的鉴定具有较高的灵敏度和特异度，且操作简单，无需特定仪器，非常适合基层医院开展。