［摘要］目的探索人结肠癌Caco-2细胞株肿瘤干细胞的分选方法。方法应用无血清悬浮培养法培养Caco-2细胞，产生肿瘤细胞球，并对肿瘤细胞球从形态学、分化、自我更新及交替培养等方面进行鉴定。结果Caco-2细胞在无血清培养基（SFM）中可存活，24 h后可产生少量体积较小松散的悬浮肿瘤球，肿瘤球体积随时间延长而增大；将肿瘤球接种于完全培养基中12 h后细胞贴壁生长，细胞形态与传统培养形成的单细胞层无明显差异，重新消化贴壁细胞后再次悬于SFM中24～72 h后仍可形成悬浮细胞球，其形态与原代相同。结论结肠癌Caco-2细胞在SFM中可生成悬浮肿瘤细胞球，采用无血清悬浮培养法可达到富集肿瘤干细胞的目的。