【摘要】目的构建D?半乳糖诱导小鼠皮肤成纤维细胞（MSF）衰老模型。方法取5~7d昆明乳鼠背部皮肤，采用Ⅰ型胶原酶消化法分离获得MSF，通过形态学观察及Vimentin免疫组织化学法鉴定MSF细胞。分别用不同浓度D?半乳糖诱导MSF细胞0、24、48h，采用β?半乳糖苷酶衰老染色、逆转录?聚合酶链反应（RT?PCR）检测衰老相关基因p53、细胞免疫荧光法分析Sirt1基因表达水平，并分析细胞衰老情况。结果光学显微镜下细胞呈多突的梭形或星形的扁平细胞，Vimentin蛋白免疫组织化学分析呈阳性。β?半乳糖苷酶衰老染色实验结果显示，不同浓度D?半乳糖诱导后染色阳性细胞数量较对照组显著增多，差异有统计学意义（P<0.01）。在D?半乳糖（20g/L）诱导24、48h后，与对照组比较，衰老MSFp53基因表达水平显著升高，差异有统计学意义（P<0.01）；细胞免疫荧光结果显示，D?半乳糖诱导48h后Sirt1蛋白表达水平明显降低。结论通过Ⅰ型胶原酶消化法及D?半乳糖诱导法成功建立了衰老模型。