【摘 要】 目的 克隆人乳酸脱氢酶B（LDH-B）基因并构建其真核表达载体。 方法 提取人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的总RNA，逆转录生成cDNA，以cDNA为模板，采用PCR扩增获得LDH-B基因编码区序列片段，限制性核酸内切酶Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切LDH-B基因片段及pUC19质粒，连接反应构建pUC19-LDH-B克隆载体，并将其转入大肠埃希菌DH5α感受态细胞，蓝白筛选挑取白色菌落，酶切验证后测序鉴定。将序列正确的LDH-B基因亚克隆到pcDNA3.1（-）载体上，构建LDH-B真核表达载体pcDNA3.1（-）-LDH-B。 结果 PCR扩增后可见约1.0 kb的特异性条带，与预期的LDH-B片段长度相符合；Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切pUC19-LDH-B后可见约2.6 kb和1.0 kb的条带，分别与pUC19和LDH-B的片段长度相符合，LDH-B测序结果与DNA序列数据库（Genebank）中的参考序列相一致；Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切pcDNA3.1（-）-LDH-B后可见约5.5 kb和1.0 kb的条带，分别与pcDNA3.1（-）和LDH-B的片段长度相符合。 结论 成功克隆了人LDH-B基因，并构建了其真核表达载体，为进一步探究LDH-B的生物学功能奠定了基础。