【摘要】目的：探讨胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞及培养的可行性。方法：取10只SD大鼠，按照改良Seglen原位两步胶原酶灌流法分离培养原代肝细胞。以SD大鼠作为肝细胞供体，采用Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注，下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离肝细胞，经200目筛过滤，滤液以200 r/min离心3~5 min，重复3次，纯化肝细胞。台盼蓝拒染实验检测分离细胞活性。将10只SD大鼠分离得到的肝细胞混合，稀释50倍后接种于包被有鼠尾胶原的培养皿或培养板中，倒置显微镜下观察分离肝细胞的形态特征，糖原染色法（PAS法）鉴定分离肝细胞，MTT法测定肝细胞在培养不同时期的增殖情况。结果：平均每只大鼠肝脏分离获得（1.8±0.14）×108/mL肝细胞，细胞活率>85%。肝细胞内因有大量的糖原颗粒，经PAS染色后被染成红色。MTT实验结果表明在培养的第八天肝细胞增殖达到峰值，培养的第九天细胞活力开始下降。结论：采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种简单、高效的获得肝细胞的方法。